培養(yǎng)基配制見文《LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基配制》。
注意：擴增環(huán)境：37°C±1°C, 5% CO 2, 90%±2% 濕度。
1.當(dāng)起始接種細胞來自凍存細胞，推薦接種密度：
細胞類型 | 推薦凍存后接種密度（活細胞/cm2) | 培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)板zui低數(shù)量 |
HUVEC | 2500 | ≥5 x T-25 flasks OR ≥1 x T-75 flask
|
HUVEC-XL | 2500 | ≥12 x T-225 flasks OR
|
Non-HUVEC Endothelial
| 5000 | ≥2 x T-25 flasks OR ≥1 x T-75 flask |
備注 | 基于zui低細胞數(shù)量和活力估算。更準(zhǔn)確接種數(shù)量和活性見COA。 | 只要能達到接種密度，也可以使用其他規(guī)格的培養(yǎng)板。 |
2.根據(jù)推薦接種密度，估算細胞培養(yǎng)容器的數(shù)量和有效表面積。
3.按1 ml/5 cm2 在培養(yǎng)容器中添加LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基，并且在37°C±1°C, 5% CO 2, 90%±2% 濕度條件下預(yù)孵至少30分鐘。
4.打開前先用酒精或異丙醇擦拭凍存管。在無菌環(huán)境下，快速扭開蓋子1/4再旋緊。 37°C水浴解凍凍存管，小心不要浸沒管子。隨時關(guān)注管子，zui后一點冰也融化后就馬上拿出管子。如果細胞解凍超過2分鐘，會影響實驗結(jié)果。
注意：不能用離心方法分離細胞和凍存保護液。這個動作比培養(yǎng)中的DMSO殘留更傷害細胞。
5.使用微量移液器小心混勻細胞懸液，加入培養(yǎng)容器。小心混勻。放回37°C±1°C, 5% CO 2, 90%±2% 濕度培養(yǎng)箱。
注意：內(nèi)皮細胞比其他細胞更容易貼凍存管壁。要轉(zhuǎn)移全部細胞需要額外施力（more forceful
trituration）。
LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基細胞復(fù)蘇規(guī)程由紅榮微再翻譯整理。
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LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基是原LONZA內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基的加強版，優(yōu)化用于人臍靜脈內(nèi)皮細胞（ HUVECs）培養(yǎng)，擴增加速。包含2%FBS和BBE。不含外源VEGF（血管內(nèi)皮生長因子）。
LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基需要混合CC-5036和CC-4542兩個組份。
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LONZA | CC-5035 | EGM-Plus BulletKit (CC-5036 +CC-4542 ) LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 | 1 Kit |
LONZA | CC-5036 | EBM-Plus Endothelial Cell Basal Medium-Plus 內(nèi)皮細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加強版 | 500mL/瓶 |
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