人間充質(zhì)干細胞流式抗體鑒定流程
準備細胞
抗體染色
上機檢測
人間充質(zhì)干細胞流式鑒定操作步驟
1、準備細胞：取培養(yǎng)的細胞離心（300 g/5min），棄去上清, 加入一定量PBS洗滌一次，棄去上清，彈散細胞，細胞重懸到5×106~10×106之間。
2、MSC人間充質(zhì)干細胞流式鑒定配色方案：
取100 ml的細胞于EP管或流式管內(nèi)，分三管染色。
*管 陽性配色 Anti-human CD90 FITC, Anti human CD105 APC，Anti-human CD45 PE-Cy7各加5 ml。
第二管 陰性配色 Anti-human HLA-RA FITC, Anti-human CD34 PE-Cy7, Anti-human CD73 APC各加5 ml。
第三管同型對照 Mouse IgG1 K Isotype Control FITC 0.6 ml，Mouse IgG1 Isotype Control PE-Cy7 1.2 ml，Mouse IgG1 Isotype Control APC 1.2 ml。
配色依據(jù)：細胞治療協(xié)會間充質(zhì)和組織干細胞委員會2006年提出了MSC鑒定的zui低標準，關(guān)于細胞表型的要求是表達CD90， CD105和CD73不表達CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR；陽性指標都需要染色，陰性指標一般選擇2-3個指標，因為是做細胞表型鑒定，所以要配齊同型對照。
3、加入相應(yīng)的抗體后混勻，建議彈管子，盡量不用槍頭直接吹打，室溫避光孵育15 min，染色過程中再混勻一次。
4、染色完成后加入1 ml的PBS洗滌細胞，離心300 g/5min。
5、棄去上清，彈散細胞，加入500 ml PBS重懸，上機檢測。
注意：1、同型對照是根據(jù)染色抗體的用量來計算的，所以每種同型對照可能加入量可能不一樣（具體可看后文同型對照章節(jié)的介紹）。
2、先上機檢測同型對照管，各檢測通道以這一管的信號設(shè)為陰性，在上機檢測抗體染色管。
3、zui后結(jié)果的顯示用峰圖來表示，每種抗體的檢測結(jié)果都與對應(yīng)的同型對照染色結(jié)果疊加展示（ overlay ）。
MSC人間充質(zhì)干細胞流式鑒定結(jié)果
注意：CD90表達量非常高，所以建議用FITC熒光染料，F(xiàn)ITC/PE-Cy7/APC這三種熒光染料之間幾乎沒有補償，所以這三種染料一起染色不需調(diào)節(jié)補償，如果是做臍帶干細胞的鑒定，CD105抗體選擇SN6克隆號，其他克隆號染色結(jié)果不好（某些克隆號染不上）。
MSC人間充質(zhì)干細胞流式配色抗體產(chǎn)品
品牌 | 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格 |
BioGems | 03011-50 | Anti-Human CD90 (Thy-1) FITC | 25 test/100 tests | 25 test 1540元 |
BioGems | 07111-77 | Anti-Human CD45 PE-Cy7 | 25 test/100 tests | 25 test 1680元 |
BioGems | 17111-80 | Anti-Human CD105 (Endoglin) APC | 25 test/100 tests | 25 test 2170元 |
BioGems | 74111-50 | Anti-Human HLA-DR FITC | 25 test/100 tests | 25 test 1400元 |
BioGems | 06411-77 | Anti-Human CD34 PE-Cy7 | 25 test/100 tests | 25 test 2170元 |
BioGems | 05811-80 | Anti-Human CD73 APC | 25 test/100 tests | 25 test 1960元 |
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| 同型對照 | 總價 | 10920元 |
BioGems | 44212-50 | Mouse IgG1 K Isotype Control FITC | 100 mg | 1120元 |
BioGems | 44212-77 | Mouse IgG1 Isotype Control PE-Cy7 | 100 mg | 1890元 |
BioGems | 44212-80 | Mouse IgG1 Isotype Control APC | 100 mg | 1750元 |
MSC人間充質(zhì)干細胞流式鑒定配色方案由Biogems提供。
上游產(chǎn)品 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基
HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基是成分確定、無血清、無異源物，無需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶或脂肪來源的人間充質(zhì)干細胞的原代培養(yǎng)擴增。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。
背景知識
間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源于中胚層，是一種類似成纖維細胞樣形態(tài)，貼壁生長，表達CD105、CD73、CD90，不表達CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79a或CD19的細胞；它可以從骨髓、脂肪、臍帶華通氏膠、胎盤、臍帶血、牙髓、絨毛膜等多種組織中被分離出來；它是具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細胞，能體外培養(yǎng)并在特定條件下分化為神經(jīng)細胞、成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞等。MSCs在細胞治療中有廣泛的用途，包括組織工程、再生醫(yī)學(xué)和被用作基因治療的載體。
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