蛋白質(zhì)組學技術的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代生物技術快速發(fā)展的重要支撐,并將生物技術取得關鍵性的突破。為幫助生命科學領域的工作者全面掌握蛋白質(zhì)組學的技術與方法、實驗難點與關鍵點、研究前沿與熱點,本技術平臺將為客戶提供蛋白組學技術服務,包括雙向凝膠電泳、等電聚焦、生物質(zhì)譜分析及非凝膠技術。折疊雙向凝膠電泳雙向凝膠電泳的原理是*向基于蛋白質(zhì)的等電點不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開。由于雙向電泳技術在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學研究中所處的重要位置,它可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究,蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用,細胞分化凋亡研究,致病機制及耐藥機制的研究,療效監(jiān)測,新藥開發(fā),癌癥研究,蛋白純度檢查,小量蛋白純化,新替代疫苗的研制等許多方面。近年來經(jīng)過多方面改進已成為研究蛋白質(zhì)組的zui有使用價值的核心方法。
等電聚焦
等電聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期問世的一種利用有pH梯度的介質(zhì)分離等電點不同的蛋白質(zhì)的電泳技術。等電聚焦凝膠電泳依據(jù)蛋白質(zhì)分子的靜電荷或等電點進行分離,等電聚焦中,蛋白質(zhì)分子在含有載體兩性電解質(zhì)形成的一個連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質(zhì)是脂肪族多氨基多羧酸,在電場中形成正極為酸性,負極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質(zhì)分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷,因此可以在電場中移動;當?shù)鞍踪|(zhì)遷移至其等電點位置時,其靜電荷數(shù)為零,在電場中不再移動,據(jù)此將蛋白質(zhì)分離。
生物質(zhì)譜
生物質(zhì)譜技術是蛋白質(zhì)組學研究中zui重要的鑒定技術,其基本原理是樣品分子離子化后,根據(jù)不同離子之間的荷質(zhì)比(M/E)的差異來分離并確定分子量。對于經(jīng)過雙向電泳分離的目標蛋白質(zhì)用胰蛋白酶酶解(水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵)成肽段,對這些肽段用質(zhì)譜進行鑒定與分析。目前常用的質(zhì)譜包括兩種:基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧質(zhì)譜(ESI- MS)。