支原體是細(xì)胞外生存的小微生物，是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)菌，也不同于病毒。從人體分離的16種支原體中，5種對人有致病性，即肺炎支原體、解脲支原體、人型支原體，生殖支原體及發(fā)酵支原體等。支原體只能黏附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮細(xì)胞表面的受體上，而不進(jìn)入組織和血液。目前診斷支原體感染用的是培養(yǎng)法、血清學(xué)檢測法和基因診斷。
分離培養(yǎng)法
分離培養(yǎng)法是支原體檢測的金標(biāo)方法，其檢測準(zhǔn)確度高。這種方法是從可疑的細(xì)胞培養(yǎng)體系中取樣，并接種到適宜支原體生長的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體，它們就會(huì)在這種瓊脂平板上*生長，終形成明顯可見的特征性菌落。分離培養(yǎng)法基本不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因此被譽(yù)為支原體檢測金標(biāo)準(zhǔn)。不過分離培養(yǎng)法也存在兩個(gè)弊端，一是檢測時(shí)間太長，支原體要長出明顯克隆至少需要4周時(shí)間。二是盡管可以檢測絕大多數(shù)支原體種類，分離培養(yǎng)法也有力所不及的時(shí)候。
DNA檢測
DNA 檢測需要將可疑樣品與指示細(xì)胞共同培養(yǎng)，因此一般需要幾天時(shí)間。DNA檢測所用的指示細(xì)胞通常是細(xì)胞質(zhì)區(qū)域較大的Vero細(xì)胞，如果原樣本中含有支原體，那么當(dāng)細(xì)胞DNA被熒光染料(如Hoechst染料)染色時(shí)，就可以在指示細(xì)胞的核周圍觀察到熒光斑點(diǎn)或熒光顆粒。分離培養(yǎng)法用來檢測支原體菌株并不可靠，而DNA法可以準(zhǔn)確的將其檢測出來。
PCR法
PCR 法也可以檢測菌株，PCR法檢測支原體只需幾個(gè)小時(shí)，是不靈敏的支原體檢測方法。該方法采用針對支原體DNA的引物用PCR檢測可疑樣本，其中PCR引物通常針對支原體的16S rRNA基因。在凝膠電泳過程中，支原體DNA會(huì)顯示為特異性條帶，以此指示支原體的存在。PCR法可以檢測大多數(shù)支原體，但謹(jǐn)慎起見可同時(shí)使用另一種檢測方法來進(jìn)行驗(yàn)證。
酶學(xué)檢測和ELISA
此外，也還存在一些其他支原體檢測方法。例如酶學(xué)檢測是將可疑樣本添加到特定底物中，在這一體系內(nèi)支原體的酶可以將ADP轉(zhuǎn)化為ATP，隨后能利用ATP發(fā)光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測，以ELISA法為基礎(chǔ)的支原體檢測一般使用針對支原體16S rRNA基因的帶標(biāo)記探針或抗體，來檢測培養(yǎng)物中是否含有支原體。
定期檢測
支原體感染會(huì)使培養(yǎng)細(xì)胞慢慢枯萎，因此對培養(yǎng)細(xì)胞定期進(jìn)行支原體檢測非常重要。一般來說每1至3個(gè)月就應(yīng)該進(jìn)行一次支原體檢測。將定期支原體檢測常規(guī)化堅(jiān)持下去，是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對支原體感染的關(guān)鍵。
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