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illumina 中通量 病毒基因測序試劑盒
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產(chǎn)品名稱:illumina MiniSeq中通量病毒基因測序試劑盒
產(chǎn)品貨號:FC-420-1004
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產(chǎn)品名稱:Miniseq Mid Output Kit(300-cycles)基因測序試劑盒
產(chǎn)品貨號:FC-420-1004
產(chǎn)品規(guī)格:
大輸出 2.4 Gb(MiniSeq Mid Output Kit (300-cycles))
每次運行的大讀數(shù) 高達800萬
試劑類型 簇生成,配對末端測序,合成測序
核酸類型 DNA,RNA
系統(tǒng)兼容性 MiniSeq
技術(shù) 測序
MiniSeq試劑盒 讀數(shù) 套件尺寸(循環(huán)) 通量 (大) 2 × 150 通量 2 × 75 通量 1 × 75 通量
MiniSeq中通量試劑盒 8 M 300 2.4 Gb 2.4 Gb 1.2 Gb 600 Mb
Gb =千兆堿基,M =百萬
產(chǎn)品介紹:
MiSeq測序試劑盒v2實現(xiàn)更高通量,減少MiSeq運行次數(shù)。MiSeq試劑盒v2保留了與v1試劑盒相同的即用型預(yù)裝試劑盒,但改良了化學(xué)過程,提高簇密度,減少循環(huán)時間,并提高質(zhì)量(Q)分值。目前還提供Micro和Nano規(guī)格的MiSeq試劑盒v2,適合低通量的應(yīng)用。
改良化學(xué)過程后,循環(huán)時間更快、片段更長、輸出更多
雙表面成像實現(xiàn)的片段數(shù)是v1試劑盒單表面成像的兩倍
使用500次循環(huán)的試劑盒可擴展片段長度
選擇您應(yīng)用的循環(huán)次數(shù)(50、300或500)
與升級的MiSeq系統(tǒng)結(jié)合使用,MiSeq試劑盒v2的雙表面成像可使每個流動槽的通量翻倍。MiSeq試劑盒v2提供可生成較長片段長度的500次循環(huán)格式,以及廣受歡迎的50次循環(huán)和300次循環(huán)格式。
MiSeq測序試劑盒v3的通量在所有MiSeq試劑盒中居*。這款v3試劑盒保留了與v1和v2試劑盒相同的即用型預(yù)裝試劑盒,通過改良試劑,可提高簇密度和片段長度,并提高質(zhì)量(Q)分值。借助MiSeq試劑盒v3,研究人員可:
使單次運行的輸出翻倍
使用600次循環(huán)試劑盒,使片段長度zui長延伸至2 x 300堿基對
將片段數(shù)量增至2500萬個,以開創(chuàng)新的應(yīng)用
所有MiSeq試劑組件都采用RFID編碼,并可巧妙地與MiSeq系統(tǒng)交互,以驗證與用戶定義的應(yīng)用之間的兼容性。
產(chǎn)品名稱:illumina 中通量 病毒基因測序試劑盒 產(chǎn)品貨號:FC-420-1004
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illumina中國授權(quán)代理商:華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司:紅榮微再(上海)生物工程技術(shù)有限公司
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產(chǎn)品名稱:Miniseq Mid Output Kit(300-cycles)基因測序試劑盒
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Illumina二代測序技術(shù),邊合成邊測序(SBS),是廣泛采用的新一代測序(NGS)技術(shù),負責(zé)產(chǎn)生世界上90%以上的測序數(shù)據(jù)。
Illumina的二代測序技術(shù)稱為邊合成邊測序(Sequencing-by-Synthesis,簡稱SBS)。SBS主要包括堿基延伸、熒光激發(fā)及信號收集、剪切等3個步驟。這3個步驟可以重復(fù),循環(huán)進行。每循環(huán)一次測定一個堿基。想測定多少個堿基(即讀長),就循環(huán)多少次。測序循環(huán)次數(shù)可以在軟件里設(shè)定。到底測序多長合適,要根據(jù)項目性質(zhì)和需求來決定。大多數(shù)情況下,SR實驗(單端測序)測定1x50個堿基,PE實驗(雙端測序)測定2x150個堿基。
1 堿基延伸
Illumina測序試劑里所使用的dNTP級具特色,它們同時具有兩個修飾基團:一個熒光基團,一個可逆終止基團。A、G、C、T 4種堿基分別標記4種不同的熒光基團,它們在不同波長的激光激發(fā)下,能夠發(fā)射不同波長(即顏色)的熒光。熒光顏色與堿基種類一一對應(yīng),因此根據(jù)激發(fā)光的波長可以識別堿基。4種堿基的終止基團是一樣的。由于終止基團的存在,所有dNTP每次都只能延伸1個堿基,無論給予多長的反應(yīng)時間。又由于該終止基團是可逆的,在熒光信號收集完畢之后,可以用剪切劑切除該終止基團,使堿基恢復(fù)自然的可延伸狀態(tài),這時即可繼續(xù)進行下一輪循環(huán),再測定一個堿基。
可逆終止基團技術(shù)是Illumina二代測序的一大特色。它與橋式PCR技術(shù)一起,構(gòu)成了Illumina二代測序的兩大支柱,為穩(wěn)定獲得高質(zhì)量的測序數(shù)據(jù)打下了堅實的基礎(chǔ)。
2 信號采集
HiSeq系列測序儀具有紅綠兩根激光管,兩個濾色片。它們兩兩組合,可以形成4種不同的激發(fā)波長,正好分別用于激發(fā)A、G、C、T 4種堿基。
Cluster上所標記的熒光基團在激光激發(fā)下產(chǎn)生的信號,可以用相機拍攝或者掃描的方式收集信號。掃描技術(shù)速度比較快,被X10系列采用。由于FC面積比較大,而且上表面和下表面要分別拍照,所以拍照過程相當耗時。對于經(jīng)典的HiSeq 2000來說,一次測序循環(huán)所產(chǎn)生的熒光信號,需要大約40分鐘的時間才能拍照收集完畢,時間比測序反應(yīng)本身還要長。
3 剪切
熒光信號收集完畢后,關(guān)閉激光,用剪切劑去除測序引物的延伸產(chǎn)物上的堿基所標記的熒光基團和終止基團。兩個修飾基團均被切除,一方面消去干擾熒光,一方面使鏈末端的堿基回復(fù)到自然的可延伸狀態(tài),為下一輪測序做好準備。
再重復(fù)合成、激發(fā)、收集等步驟,即可進行第二個堿基的測序。
測序循環(huán)可以重復(fù)多次。理論上可以一直重復(fù),直到信噪比降低得無法有效識別堿基信號為止。由于熒光基團的發(fā)光效率持續(xù)不斷在衰減,Taq酶的活性也在持續(xù)不斷地衰減,所以實際上測序循環(huán)次數(shù)是有限的,大重復(fù)次數(shù)與sbs試劑的配方有關(guān)。測序的循環(huán)次數(shù)可以在軟件設(shè)置過程中人為,這個重復(fù)次數(shù)就是每個測序片段的讀長。目前,Illumina平臺的讀長有2x100 bp,2x125 bp,2x150 bp,2x300 bp等多種,其中2x150 bp用得zui廣泛。
單端測序:單端測序(Single-read)首先將DNA樣本進行片段化處理形成200-500bp的片段,引物序列連接到DNA片段的一端,然后末端加上接頭,將片段固定在flow cell上生成DNA簇,上機測序單端讀取序列。
雙端測序:雙端測序(Paired-end)方法是指在構(gòu)建待測DNA文庫時在兩端的接頭上都加上測序引物結(jié)合位點,在一輪測序完成后,去除一輪測序的模板鏈,用對讀測序模塊(Paired-End Module)引導(dǎo)互補鏈在原位置再生和擴增,以達到第二輪測序所用的模板量,進行第二輪互補鏈的合成測序。
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