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人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展

*代 培養(yǎng)基+牛血清

第二代 培養(yǎng)基+牛血清替代品：人血清、血小板裂解液和臍帶血清

第三代 無血清、無動(dòng)物源、成分確定的培養(yǎng)基

第三代人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基不含牛血清或人血清之類的血清替代品，無動(dòng)物源而且成分確定，免除了異種血清帶來的病原體污染風(fēng)險(xiǎn)，而且批次穩(wěn)定，適合干細(xì)胞治療的臨床研究。而根據(jù)衛(wèi)計(jì)委和食藥監(jiān)2015年發(fā)布的《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》，干細(xì)胞制劑的培養(yǎng)基應(yīng)該盡可能避免使用人源或動(dòng)物源性血清。

HY StemCell 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

HY StemCell CCGmHum^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基是成分確定、無血清、無動(dòng)物源，無需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶或脂肪來源的人間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)擴(kuò)增。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基包括【Basal Medium 基礎(chǔ)培養(yǎng)基】 和 【Supplement Medium 細(xì)胞因子添加物】兩部分?；A(chǔ)培養(yǎng)基中添加Hepes和L-谷氨酰胺。細(xì)胞因子添加物中含有多種細(xì)胞生長因子、粘附蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。

HY StemCell 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基現(xiàn)貨供應(yīng)

StemCell 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

StemCell MesenCult™-XF 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基適用人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)，是無動(dòng)物源無血清的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基。MesenCult™-XF MSC培養(yǎng)基優(yōu)化用于間充質(zhì)干細(xì)胞的體外擴(kuò)增以及CFU-F分析計(jì)數(shù)。支持MSCs的長期生長，同時(shí)維持細(xì)胞多系分化潛能。

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StemRD 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

MesenGro®化學(xué)成分明確人類間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（以下簡稱MesenGro）是為擴(kuò)增從骨髓、臍帶血或脂肪組織提取的人類間充質(zhì)干細(xì)胞（human mesenchymal stem cells, hMSCs)而設(shè)計(jì)的無血清培養(yǎng)基。MesenGro化學(xué)成分明確，所有組分為化學(xué)合成或重組純化的蛋白。MesenGro無異源蛋白，不含直接從任何動(dòng)物組織提取成份。因此它不存在批間誤差和潛在的動(dòng)物源性病原體。如果配合使用特定的原代間充質(zhì)干細(xì)胞添加液Prime和培養(yǎng)板，MesenGro還可以直接用于從原代組織提取原代細(xì)胞的培養(yǎng),并省去鋪板的工序和時(shí)間，免去鋪板膠的費(fèi)用。

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LONZA UltraCULTURE^TM（一款適合多種細(xì)胞類型的通用型無血清培養(yǎng)基）

LONZA UltraCULTURE^TM Serum-free Medium是一種通用型無血清培養(yǎng)基，適用于培養(yǎng)貼壁和懸浮的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。適于在疫苗生產(chǎn)中制備病毒顆粒；支持雜交瘤形成時(shí)的細(xì)胞融合，支持單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞系的細(xì)胞生長。適合多種細(xì)胞類型的無血清培養(yǎng)，包括HeLa、HEC、N-10、HNK、MB231等細(xì)胞。

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歡迎您致電 華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司  ：152 1681 4001。紅榮微再-客服: 316 808 6348  經(jīng)銷商專員

背景知識(shí)

2015年國家重新開放干細(xì)胞行業(yè)政策以來，衛(wèi)計(jì)委等已經(jīng)發(fā)布了多個(gè)文件：

《國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃干細(xì)胞與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)專項(xiàng)實(shí)施方案（征求意見稿）》

目標(biāo)：凝聚優(yōu)勢力量，重點(diǎn)針對(duì)干細(xì)胞發(fā)生，發(fā)育和形成功能細(xì)胞過程中的重要科學(xué)問題，深入開展干細(xì)胞、生物材料、組織工程、生物人工器官，以及干細(xì)胞與疾病發(fā)生等方面的基礎(chǔ)研究、應(yīng)用基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化開發(fā)。整體提升我國干細(xì)胞及其轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的實(shí)力，加快科研成果的應(yīng)用。

任務(wù)：1. 多能干細(xì)胞干性維持機(jī)制。2. 組織干細(xì)胞的獲得及功能。3. 干細(xì)胞定向分化及細(xì)胞轉(zhuǎn)分化機(jī)制。4. 干細(xì)胞的體內(nèi)功能與作用機(jī)制。5. 基于干細(xì)胞的器官再造。6. 干細(xì)胞資源庫。7. 干細(xì)胞臨床前評(píng)估。8. 干細(xì)胞轉(zhuǎn)化與應(yīng)用。

《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》（試行）（征求意見稿）

提出了適用于各類可能應(yīng)用到臨床的干細(xì)胞（除已有規(guī)定的造血干細(xì)胞移植外）在制備和臨床前研究階段的基本原則。每個(gè)具體干細(xì)胞制劑的制備和使用過程，必須有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)操作程序并按其執(zhí)行，以確保干細(xì)胞制劑的質(zhì)量可控性以及治療的安全性和有效性。

培養(yǎng)基部分摘錄：

培養(yǎng)基 干細(xì)胞制劑制備所用的培養(yǎng)基成分應(yīng)有足夠的純度并符合無菌、無致病微生物及內(nèi)毒素的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),殘留的培養(yǎng)基對(duì)受者應(yīng)無不良影響；在滿足干細(xì)胞正常生長的情況下，不影響干細(xì)胞的生物學(xué)活性，即干細(xì)胞的“干性”及分化能力。在干細(xì)胞制劑制備過程中，應(yīng)盡量避免使用抗生素。

若使用商業(yè)來源培養(yǎng)基，應(yīng)選擇有資質(zhì)的生產(chǎn)商并由其提供培養(yǎng)基的組成成分資料及相關(guān)質(zhì)量合格證明。必要時(shí)，應(yīng)由專業(yè)檢定機(jī)構(gòu)對(duì)每批培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，并出具檢驗(yàn)報(bào)告。

除特殊情況外，應(yīng)盡可能避免在干細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用人源或動(dòng)物源性血清，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動(dòng)物血清，應(yīng)確保其無特定動(dòng)物源性病毒污染。嚴(yán)禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。

若培養(yǎng)基中含有人的血液成份，如白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和各種細(xì)胞因子等，應(yīng)明確其來源、批號(hào)、質(zhì)量檢定合格報(bào)告，并盡量采用國家已批準(zhǔn)的可臨床應(yīng)用的產(chǎn)品。

《干細(xì)胞臨床研究管理辦法（試行）》

關(guān)于干細(xì)胞臨床研究的醫(yī)療機(jī)構(gòu)的條件與責(zé)任、干細(xì)胞臨床研究的立項(xiàng)與備案、臨床研究流程及要求、臨床研究報(bào)告制度、專家委員會(huì)責(zé)任和監(jiān)督管理。

《*干細(xì)胞臨床研究機(jī)構(gòu)名單》*30家單位

《第二批干細(xì)胞臨床研究備案機(jī)構(gòu)》次批72家單位 2017年11月

《干細(xì)胞通用要求》

該要求圍繞干細(xì)胞制劑的安全性、有效性及穩(wěn)定性等關(guān)鍵問題，建立了干細(xì)胞的供者篩查、組織采集、細(xì)胞分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇、運(yùn)輸及檢測等的通用要求

可見，干細(xì)胞治療的臨床研究正在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化。使用無血清培養(yǎng)基更加安全，監(jiān)管要求更少。

間充質(zhì)干細(xì)胞介紹

間充質(zhì)干細(xì)胞是一類多能干細(xì)胞，具有分化成軟骨、成骨、脂肪和神經(jīng)等多種細(xì)胞類型的潛能。因?yàn)榉蛛x培養(yǎng)方便，具有低免疫原性和免疫調(diào)節(jié)特性，在細(xì)胞治療領(lǐng)域前景。

（MSCs的分化，圖源網(wǎng)絡(luò)）

間充質(zhì)干細(xì)胞的來源

從1970年發(fā)現(xiàn)以來，脂肪組織、胎盤、牙髓、滑膜、外周血、牙周韌帶、子宮內(nèi)膜、臍帶和臍帶血中都有研究發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞[1]，不過應(yīng)用比較多的來源還是骨髓、脂肪和臍帶組織中的間充質(zhì)干細(xì)胞[2]。目前，異體間充質(zhì)干細(xì)胞密度zui高來源是臍帶，每毫升zui高能獲得470萬個(gè)MSC，而自體間充質(zhì)干細(xì)胞密度zui高來源是脂肪組織，每毫升zui高能獲得155萬個(gè)MSC[3]。HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基就是適用臍帶和脂肪組織來源的hMSC培養(yǎng)。

間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)[4]

人間充質(zhì)干細(xì)胞的下游應(yīng)用是組織修復(fù)等疾病治療，因此它的培養(yǎng)要滿足醫(yī)用的高標(biāo)準(zhǔn)。隨著臨床應(yīng)用的成熟，間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基也經(jīng)歷了從有血清到無血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)變。

有血清培養(yǎng)基一開始使用的是胎牛血清，胎牛血清是天然產(chǎn)品，批次間差異大，影響實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性，尤其還是異源物，會(huì)有病原體污染風(fēng)險(xiǎn)和免疫影響，不利治療安全，需要額外監(jiān)管。于是越來越多的血清培養(yǎng)基選擇了自體或同源異體的人源血清作為培養(yǎng)基添加物，包括人血清、血小板裂解液和臍帶血清。

低血清或人源血清仍然不夠穩(wěn)定，也不能*免除病原體的污染風(fēng)險(xiǎn)，隨之興起的是成分確定的無血清培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基用重組人蛋白代替血清中的天然蛋白，以此來消滅異種蛋白輸入人體可能會(huì)引起的免疫抗體反應(yīng)。比如血清中zui基礎(chǔ)的白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和胰島素，無血清培養(yǎng)基都改用重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白和重組人胰島素代替，而不是提取天然產(chǎn)物。無血清培養(yǎng)基發(fā)展中，確定了多種生長因子是人間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增必須添加的。HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基細(xì)胞因子添加物中含有多種細(xì)胞生長因子、粘附蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。

參考文獻(xiàn)

1 FENG-JUAN LV et al.Concise Review: The Surface Markers and Identity of Human Mesenchymal Stem Cells.2014.

2 Marcin Majka et al.Concise Review: Mesenchymal Stem Cells in Cardiovascular Regeneration: Emerging Research Directions and Clinical Applications.2017.

3 C. ThomasVangsness Jr. et al.Umbilical Cord Tissue Offers the Greatest Number of Harvestable Mesenchymal Stem Cells for Research and Clinical Application: A Literature Review of Different Harvest Sites.2015.

4 Dolly Mushahary et al.Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017.

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