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人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基已經(jīng)發(fā)展到了第三代

*代 培養(yǎng)基+牛血清

第二代 培養(yǎng)基+牛血清替代品：人血清、血小板裂解液和臍帶血清

第三代 無(wú)血清、無(wú)動(dòng)物源、成分確定的培養(yǎng)基

第三代人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基不含牛血清或人血清之類(lèi)的血清替代品，無(wú)動(dòng)物源而且成分確定，免除了異種血清帶來(lái)的病原體污染風(fēng)險(xiǎn)，批次穩(wěn)定，適合干細(xì)胞治療的臨床研究。

HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

中文名：HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

英文名：HY STEMCELL CCGmHuM^TM  Human MSCs Growth Medium

HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基是成分確定、無(wú)血清、無(wú)異源物，無(wú)需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶或脂肪來(lái)源的人間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)擴(kuò)增。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。

特點(diǎn)

Serum-free 無(wú)血清成分

Xeno-free 無(wú)異種蛋白

Chemically-defined 化學(xué)成分明確

NO plate coating necessary 無(wú)須昂貴的鋪板蛋白

Perform better than FBS medium 生長(zhǎng)分化優(yōu)于血清培養(yǎng)基

組份

HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基包括【Basal Medium 基礎(chǔ)培養(yǎng)基】 和 【Supplement Medium 細(xì)胞因子添加物】?jī)刹糠??；A(chǔ)培養(yǎng)基中添加HEPES和L-谷氨酰胺。細(xì)胞因子添加物中含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、粘附蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。

培養(yǎng)表現(xiàn)

使用HY StemCell CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，傳到第7代，MSC形態(tài)功能維持良好。

應(yīng)用

適用于原代培養(yǎng)臍帶或脂肪組織來(lái)源的人間充質(zhì)干細(xì)胞。

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：*培養(yǎng)基

細(xì)胞系：臍帶或脂肪組織來(lái)源的人間充質(zhì)干細(xì)胞

細(xì)胞類(lèi)型：貼壁

儲(chǔ)存

基礎(chǔ)培養(yǎng)基保存在2～8℃。細(xì)胞因子添加物保存在–20°C。

使用注意

為保障活性，建議把【Supplement Medium 細(xì)胞因子添加物】一次解凍后分裝再凍存，不宜反復(fù)凍融。

訂購(gòu)信息

歡迎您致電 華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司  ：152 1681 4001。紅榮微再-客服: 316 808 6348  經(jīng)銷(xiāo)商專員

背景知識(shí)

一 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展

人間充質(zhì)干細(xì)胞的來(lái)源

從1970年發(fā)現(xiàn)以來(lái)，脂肪組織、胎盤(pán)、牙髓、滑膜、外周血、牙周韌帶、子宮內(nèi)膜、臍帶和臍帶血中都有研究發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞[1]，不過(guò)應(yīng)用比較多的來(lái)源還是骨髓、脂肪和臍帶組織中的間充質(zhì)干細(xì)胞[2]。目前，異體間充質(zhì)干細(xì)胞密度zui高來(lái)源是臍帶，每毫升zui高能獲得470萬(wàn)個(gè)MSC，而自體間充質(zhì)干細(xì)胞密度zui高來(lái)源是脂肪組織，每毫升zui高能獲得155萬(wàn)個(gè)MSC[3]。HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基就是適用臍帶和脂肪組織來(lái)源的hMSC培養(yǎng)。

人間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)發(fā)展[4]

人間充質(zhì)干細(xì)胞的下游應(yīng)用是組織修復(fù)等疾病治療，因此它的培養(yǎng)要滿足醫(yī)用的高標(biāo)準(zhǔn)。隨著臨床應(yīng)用的成熟，間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基也經(jīng)歷了從有血清到無(wú)血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)變。

有血清培養(yǎng)基一開(kāi)始使用的是胎牛血清，胎牛血清是天然產(chǎn)品，批次間差異大，影響實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性，尤其還是異源物，會(huì)有病原體污染風(fēng)險(xiǎn)和免疫影響，不利治療安全，需要額外監(jiān)管。于是越來(lái)越多的血清培養(yǎng)基選擇了自體或同源異體的人源血清作為培養(yǎng)基添加物，包括人血清、血小板裂解液和臍帶血清。

低血清或人源血清仍然不夠穩(wěn)定，也不能*免除病原體的污染風(fēng)險(xiǎn)，隨之興起的是成分確定的無(wú)血清培養(yǎng)基。無(wú)血清培養(yǎng)基用重組人蛋白代替血清中的天然蛋白，以此來(lái)消滅異種蛋白輸入人體可能會(huì)引起的免疫抗體反應(yīng)。比如血清中zui基礎(chǔ)的白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和胰島素，無(wú)血清培養(yǎng)基都改用重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白和重組人胰島素代替，而不是提取天然產(chǎn)物。無(wú)血清培養(yǎng)基發(fā)展中，確定了多種生長(zhǎng)因子是人間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增必須添加的。HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基細(xì)胞因子添加物中含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、粘附蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。

二 人類(lèi)間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與原代培養(yǎng)方法[5]

新生兒臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)

新生兒臍帶組織剝?nèi)∪A通氏膠，以組織塊培養(yǎng)法或酶消化法分離新生兒間充質(zhì)干細(xì)胞，

貼壁法做原代培養(yǎng)。

新生兒臍帶血來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)

新生兒臍帶血樣本，與磷酸緩沖液 1:1 稀釋后，以密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞，貼

壁法培養(yǎng)。定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞達(dá)到匯合。

新生兒胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)

剝?nèi)√ケP(pán)羊膜、絨毛膜或絨毛組織，以酶消化法分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞，貼壁法做原代

培養(yǎng)。

人類(lèi)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)

成人脂肪組織，以酶消化法分離脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，貼壁法做原代培養(yǎng)。

人類(lèi)牙髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)

牙齒樣本，完整剝離牙髓，以酶消化法分離牙髓間充質(zhì)干細(xì)胞，貼壁法做原代培養(yǎng)。

人類(lèi)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)

人骨髓液樣本，以密度梯度離心法分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，貼壁法作原代培養(yǎng)。

人類(lèi)宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)

宮內(nèi)膜組織樣本以酶消化法分離子宮內(nèi)膜干細(xì)胞，并做原代培養(yǎng)?；?/span>

人羊水來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)

人羊水樣本，100 目濾器過(guò)濾后離心，棄上清。以培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，貼壁法培養(yǎng)。

定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞達(dá)到匯合。

人類(lèi)母乳來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)

人類(lèi)母乳樣本，100 目濾器過(guò)濾后離心，棄上清。以培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，貼壁法培養(yǎng)。

定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞達(dá)到匯合。

人類(lèi)滑膜來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)

人類(lèi)滑膜組織樣本，以酶消化法分離滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞。離心洗滌后，貼壁法培養(yǎng)。定

期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞達(dá)到匯合。

三 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞[6]

圖源網(wǎng)絡(luò)：臍帶和華通氏膠

人臍帶內(nèi)、臍血管周?chē)胸S富的基質(zhì)即華通膠，膠內(nèi)含有大量間充質(zhì)干細(xì)胞——人臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord Wharton′s jellyderived mesenchymal stem cells，hWJ-MSC），該干細(xì) 胞能夠穩(wěn)定表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞*的分子標(biāo)記物。 近幾年，hWJ-MSC 已成為干細(xì)胞治療領(lǐng)域理想的種 子細(xì)胞。其高表達(dá) CＤ54、CＤ146 等生長(zhǎng)因子，提示其具有高度增殖分化潛能，同時(shí) hWJ-MSC 通過(guò)分泌相關(guān)因子或者通過(guò)細(xì)胞與細(xì)胞間直接接觸調(diào)節(jié)單核 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞的免疫功能?；?hWJMSC 取材方便、來(lái)源廣泛、增殖分化潛能高、免疫原性低等特點(diǎn)，hWJ-MSC 的相關(guān)研究已經(jīng)從zui初的體 外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)展到體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，更有學(xué)者已經(jīng)將 hWJ-MSC 應(yīng)用到了臨床實(shí)驗(yàn)中。

參考文獻(xiàn)

1 FENG-JUAN LV et al.Concise Review: The Surface Markers and Identity of Human Mesenchymal Stem Cells.2014.

2 Marcin Majka et al.Concise Review: Mesenchymal Stem Cells in Cardiovascular Regeneration: Emerging Research Directions and Clinical Applications.2017.

3 C. ThomasVangsness Jr. et al.Umbilical Cord Tissue Offers the Greatest Number of Harvestable Mesenchymal Stem Cells for Research and Clinical Application: A Literature Review of Different Harvest Sites.2015.

4 Dolly Mushahary et al.Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017.

5 SZDB/Z 126 2015《人類(lèi)間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)建設(shè)與管理規(guī)范》

6 何蓓 等.人臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及研究新進(jìn)展.2016.

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