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了解一下無(wú)血清細(xì)胞凍存液的操作步驟及注意事項(xiàng)吧
更新時(shí)間：2023-02-07 點(diǎn)擊次數(shù)：1184次
無(wú)血清細(xì)胞凍存液通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株(腫瘤細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞)，凍存細(xì)胞可在-80℃長(zhǎng)期保存。配方成分明確，不含動(dòng)物來(lái)源性蛋白，不含血清，可減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細(xì)胞的安全。
該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)成分，提高細(xì)胞存活率和活力，亦適合于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞。
下面讓我們來(lái)了解一下無(wú)血清細(xì)胞凍存液的操作步驟及注意事項(xiàng)吧。
操作步驟：
1.常規(guī)方法收集對(duì)數(shù)期的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞于試管中。
2.根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存細(xì)胞數(shù)。
3.將所需數(shù)目的細(xì)胞懸浮液置于離心管中，1000rmp，5分鐘離心收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，棄去離心管中的上清液。
4.加入適量的細(xì)胞凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度約為5×105-1×107/ml。輕柔地混勻細(xì)胞，制成細(xì)胞混合液。
5.將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)記的凍存管中，建議每管1ml或1.5ml。
6.直接將分裝好的細(xì)胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長(zhǎng)期冷凍保存。
7.如果想液氮中長(zhǎng)期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天時(shí)間，方可移至液氮罐中保存。
凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟：
1.從冰箱中取出凍存的細(xì)胞，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。
2.待凍存管中細(xì)胞混合液融化后，立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于冷凍管中與細(xì)胞混合，將其中的混合液移至含有約5ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的離心管中，1000rmp，5分鐘離心收集凍存細(xì)胞沉淀，移去上清液(操作時(shí)小心，切勿將細(xì)胞沉淀移去)。
3.加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩加入到細(xì)胞沉淀，輕柔地混勻，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中。
4.鏡檢細(xì)胞后，可根據(jù)各自研究的需要和方法經(jīng)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：
1.凍存細(xì)胞分裝后，應(yīng)減少在外存放時(shí)間，盡快移入到-80℃超低溫冰箱。
2.對(duì)于干細(xì)胞(ES細(xì)胞)、原代細(xì)胞等凍存時(shí)，我們建議用戶在使用前，事先對(duì)所凍存的胞進(jìn)行至少為期1周的該產(chǎn)品試驗(yàn)性細(xì)胞冷凍保存培養(yǎng)，確認(rèn)性能后再進(jìn)行正式凍存。
3.本品含有10%DMSO，部分對(duì)DMSO敏感的細(xì)胞，建議對(duì)其進(jìn)行至少1周的本產(chǎn)品試驗(yàn)性的細(xì)胞凍存培養(yǎng)，確認(rèn)性能后再正式凍存。
4.對(duì)于沒(méi)有保種的新的細(xì)胞類型，我們建議同時(shí)用含有血清的凍存液同時(shí)凍存，確保細(xì)胞凍存不出現(xiàn)意外全部死亡等現(xiàn)象發(fā)生。
5.細(xì)胞凍存液經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的內(nèi)毒素、滲透壓、病原體和pH檢驗(yàn)，確保產(chǎn)品不含病菌、病毒以及支原體等。用于常規(guī)的細(xì)胞凍存，-80℃可長(zhǎng)期保存，細(xì)胞存活率在90-98%。
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